藏绵羊PIN1基因序列特征解析及其在睾丸中的表达与定位

本研究旨在探究藏绵羊肽基脯氨酰顺反异构酶（Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase NIMA-interacting 1,PIN1）的分子特征及其在睾丸发育中的潜在生物学功能。以藏绵羊睾丸组织为研究对象，采用分子克隆和生物信息学方法解析PIN1基因的分子特征，并运用实时荧光定量PCR和免疫荧光染色技术对3月龄（性成熟前阶段）、1周岁（性成熟后阶段）及3周岁（成年期）藏绵羊睾丸组织中PIN1基因的表达及亚细胞定位进行研究。结果显示，藏绵羊PIN1基因CDS区全长492 bp，编码163个氨基酸，与普通绵羊参考序列完全一致。该基因在3月龄藏绵羊睾丸组织中呈低表达状态，而在1周岁和3周岁藏绵羊睾丸组织中的表达量极显著上调（P<0.01）。免疫定位显示，在3月龄时，PIN1蛋白的阳性信号主要分布于生殖母细胞核周区域，而在性成熟后阶段（1周岁和3周岁）则主要富集于血睾屏障的细胞连接结构中。综上，PIN1基因可能通过双重作用机制调控藏绵羊的生精微环境稳态，即在性成熟前阶段通过调控生殖母细胞发育，在性成熟后通过维持血睾屏障功能完整性协同发挥作用。

西门塔尔牛FGF9基因CDS区克隆、分子特征及组织表达分析

为了研究成纤维细胞生长因子9(Fibroblast growthfactor receptor 9,FGF9)基因在西门塔尔牛主要组织中的表达特征，采用聚合酶链式反应技术（Polymerase chain reaction,PCR）对FGF9基因的编码区（Coding sequence,CDS）进行克隆，利用生物信息学方法对FGF9基因编码序列分子特征进行分析，并使用qRT-PCR检测FGF9基因在西门塔尔牛不同组织及不同生长时期主要肌肉组织中的表达量。结果表明，西门塔尔牛FGF9基因CDS区长度为627 bp，包含4个开放阅读框（Open reading frame,ORF），共编码208个氨基酸；FGF9蛋白为水溶性蛋白，不含跨膜螺旋结构，氨基酸序列中存在21个磷酸化位点和1个糖基化位点。FGF9蛋白与PDGFR、EGFR、FGFR、IGF、TEK等蛋白相互作用，且其主要分布在线粒体和细胞质中。西门塔尔牛与牦牛亲缘关系最为接近，而与非洲象的亲缘关系相对较远。组织表达谱结果显示，FGF9基因在成年西门塔尔牛的主要组织中均有表达，且在心肌中的表达量极显著高于其他组织（P<0.01），在股二头肌和肝脏组织中的表达量相对较低；成年牛心肌和背最长肌中FGF9基因的表达量显著高于犊牛（P<0.05）。说明FGF9基因在西门塔尔牛肌肉组织中存在时空表达特征，在调控牛骨骼肌生长发育及肌纤维类型转化中发挥重要功能。

山羊肾细胞氧化还原状态对小反刍兽疫病毒体外复制的影响

为研究山羊肾细胞（LDG-2）氧化还原状态对小反刍兽疫病毒（PPRV）体外复制的影响，采用MTT法分别测定N-乙酰半胱氨酸（NAC）、维生素C(VC)、还原型谷胱甘肽（GSH）和叔丁基过氧化氢（TBHP）的安全浓度及PPRV感染细胞活力；分别用DCFH-DA荧光探针和ELISA检测了与细胞氧化应激和氧化还原状态有关的活性氧（ROS）水平和丙二醛（MDA）含量，以及超氧化物歧化酶（SOD）、黄嘌呤氧化酶（XOD）、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADPH）氧化酶（NOX）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活性；用IFA和Western-blot观察PPRV在LDG-2细胞中的复制与增殖。结果表明，PPRV感染的LDG-2细胞中的ROS水平、MDA含量，以及NOX和XOD活性极显著增加（P<0.001）,GSH-Px活性显著降低（P<0.05）,PPRV-N蛋白表达水平显著或极显著上调（P<0.05或P<0.01）。NAC和GSH处理能极显著降低PPRV感染细胞的ROS水平、MDA含量，以及NOX和XOD活性（P<0.001）,PPRV-N蛋白表达水平显著下调（P<0.05或P<0.01）。经VC和TBHP处理的PPRV感染细胞中ROS水平、MDA含量，以及NOX和XOD活性极显著升高（P<0.01或P<0.001）,PPRV-N蛋白表达水平显著上调（P<0.05）。上述结果表明，PPRV感染可诱导LDG-2细胞的氧化应激，NAC和GSH可缓解PPRV感染细胞的氧化应激，进而抑制病毒的复制，TBHP和VC则可通过增强PPRV诱导的氧化应激促进病毒复制。

小反刍兽疫病毒RT-RPA-LFD快速检测方法的建立

为建立适用于小反刍兽疫病毒（PPRV）的临床快速检测方法，本研究基于PPRV N基因序列设计并筛选引物与探针，通过优化逆转录-重组酶聚合酶扩增（RT-RPA）反应体系的温度和时间，联合侧向层析试纸条（LFD）构建RT-RPA-LFD检测方法，并系统评价其性能。结果表明，该方法在42℃反应15 min即可完成扩增，并可通过LFD实现结果的可视化。其灵敏度为10拷贝/μL，与常规RT-PCR灵敏度相当。对山羊传染性胸膜肺炎、绵羊支原体和丝状支原体山羊亚种等其他病原体无交叉，批间和批内重复试验均呈现出理想的检测结果，且临床样本检测结果与荧光RT-PCR检测结果的符合率达100%。综上所述，本研究建立的RT-RPA-LFD检测方法用时短、操作便捷、兼具高灵敏度与强特异性，且重复性好，适用于小反刍兽疫病毒的现场快速检测。

基于系统药理学探讨α-倒捻子素抗金黄色葡萄球菌性奶牛乳腺炎的机制

为了运用系统药理学分析α-倒捻子素（α-MG）对金黄色葡萄球菌性奶牛乳腺炎的治疗作用机制，本研究测定了α-MG对奶牛乳腺炎源金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度（MIC）、最小杀菌浓度（MBC）和最小生物被膜抑制浓度（MBIC）；利用PharmMapper、CTD和SEA数据库获取α-MG的作用靶点，通过GeneCards、OMIM和TTD数据库搜集乳腺炎靶点，分析二者之间的交集；使用STRING数据库建立蛋白质相互作用网络（PPI），并以Cytoscape 3.9.1软件进行拓扑分析；通过DAVID数据库将交集靶点进行富集分析；分别对α-MG和关键靶点进行分子对接和分子动力学模拟。结果表明，α-MG对4株奶牛乳腺炎源金黄色葡萄球菌的MIC为0.5～1 μg/mL，MBC为2～4 μg/mL，MBIC为1～2 μg/mL；B淋巴细胞瘤蛋白2（BCL2）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白水解酶3（CASP3）、白细胞介素6（IL6）等是α-MG作用乳腺炎的核心靶点；GO富集分析得到246个条目；KEGG富集分析得到104条通路；计算机模拟显示，α-MG可与核心靶点紧密结合并形成稳定的复合物。综上，α-MG对奶牛乳腺炎源金黄色葡萄球菌具有良好的抗菌活性与抗生物被膜活性；通过作用于BCL2、CASP3和IL6等核心靶点调控IL-17 、TNF、细胞凋亡等通路以治疗奶牛乳腺炎。

反刍动物蓝舌病的研究进展

蓝舌病（BT）是由蓝舌病病毒（BTV）引起、以库蠓等吸血昆虫为主要传播媒介的虫媒传染病，可感染绵羊、牛、山羊等多种家养及野生反刍动物。其中，绵羊感染后常出现发热、口腔及胃肠道黏膜卡他性炎症、蹄部病变等典型症状，严重时可致死亡；牛多为隐性感染，却易成为病毒扩散的重要传染源，给疫病防控增加难度。目前全球已鉴定出36种BTV血清型，各型间交叉免疫性差，且受全球气候变暖和国际贸易活动增加的影响，该病流行范围不断扩大，对我国牛、羊等反刍动物产业构成严重威胁。当前针对蓝舌病尚无特效治疗药物，因此，早期准确诊断对疫病防控至关重要。本文结合国内外蓝舌病流行情况，重点对BTV的病原学特征与诊断技术进行综述，旨在为有效预防和控制BT的传播提供科学依据和参考。

基于HSP90基因的羊吕氏泰勒虫PCR检测方法的建立与评价

吕氏泰勒虫是一种严重危害养羊业的血液原虫，建立快速、准确的检测方法对其防控至关重要。为开发一种以羊吕氏泰勒虫热休克蛋白90基因（HSP90）为新靶标的PCR检测方法，本研究根据吕氏泰勒虫HSP90基因序列设计特异性引物，通过梯度PCR优化反应条件，并对方法的敏感性、特异性和重复性进行系统评价。结果表明，本研究建立的PCR检测方法的最佳退火温度为60.5 ℃，退火时间为30秒。对该方法进行的性能评价结果表明，其敏感性高，最低可检测到32.4 pg/μL的基因组DNA（敏感性较18S rRNA靶标提高了3倍以上）；特异性强，与豆状囊尾蚴、多房棘球蚴、弓形虫及球虫的DNA均无交叉反应；重复性好，在不同批次和批内试验中结果稳定。对现场采集的羊血液样品的检测结果表明，18份样品的阳性检出率为27.78%，测序结果表明扩增产物为吕氏泰勒虫。本研究首次成功建立了基于HSP90基因的羊吕氏泰勒虫PCR检测方法。该方法具有高效、灵敏、特异和可靠的优点，不仅为吕氏泰勒虫的流行病学调查和精准诊断提供了新的有效工具，而且由于HSP90在泰勒虫应激生存和致病中的关键作用，本研究也为后续探索其基因功能、开发靶向药物奠定了坚实基础。

梅花鹿Zfx基因CDS区克隆、生物信息学及组织表达分析

本研究旨在通过克隆梅花鹿Zfx基因并解析其分子特征，为设计梅花鹿Zfx干扰载体提供关键的序列靶点和理论依据。本试验采集梅花鹿睾丸组织，提取总RNA并反转录为cDNA，设计3对引物分段扩增Zfx基因CDS区，通过克隆测序获得全长序列，利用生物信息学工具分析其理化性质、亲疏水性、糖基化/磷酸化位点及二、三级结构，构建系统进化树、开展同源性分析并利用qRT-PCR检测其组织表达规律。结果显示，成功克隆获得梅花鹿Zfx基因CDS区全长2 154 bp，梅花鹿Zfx基因编码717个氨基酸，蛋白分子式为C_3470H5495N_995O1111S₄₈，相对分子量80 467.68，理论等电点5.64，不稳定系数47.55，属不稳定亲水蛋白；含52个磷酸化位点(31个Ser、6个Tyr、20个Thr)和3个糖基化位点。二级结构以无规卷曲(75.08%)为主，三级结构预测与二级结构一致。系统进化树分析显示，梅花鹿与马鹿(鹿科)亲缘关系最近；与同属偶蹄目反刍亚目牛科的家牛、野牦牛、山羊、绵羊亲缘关系次之；与虎、家猫、家犬等非反刍动物亲缘关系较远。重叠区域同源性分析表明，梅花鹿与10个物种的Zfx基因序列同源性达95.04%，其中与马鹿同源性最高(99.54%)。GO功能富集分析显示Zfx基因参与了性别决定等生物过程，而KEGG通路富集分析表明其参与了癌症相关通路。组织表达分析表明，Zfx基因在睾丸和肝脏中高表达，且极显著高于肌肉组织(P＜0.01)。本研究发现，梅花鹿Zfx基因在10个物种进化中表现高度保守，蛋白结构特征提示其可能通过磷酸化修饰参与泛素-蛋白酶体降解途径，调控精子发生。

奶牛乳房炎研究进展

介绍了乳房炎的损害 ,其致病体及分类 ;其发病率与致病体、环境、管理、年龄、季节、遗传因素等的关系 ;乳房炎的诊断方法 ;其与经济性状的关系 ;重点介绍了预防措施及治疗方法。

奶牛子宫内膜炎综述

甘南牦牛肉与其他良种牛肉氨基酸含量对比分析

通过对甘南牦牛肉和其他良种牛肉氨基酸含量进行对比分析,结果表明:甘南牦牛肉中的氨基酸含量十分丰富,而且全面,18种氨基酸的总量(TAA)为85.75 g/100g,均比秦川牛肉、鲁西黄牛肉、安格斯牛肉、夏洛莱牛肉和西门塔尔牛肉的氨基酸总量高,必需氨基酸含量(EAA)和非必需氨基酸含量(NEAA)也比其他5种牛肉高。甘南牦牛肉中必需氨基酸总量占总氨基酸的比值(EAA/TAA)为38.04%。氨基酸评分结果表明,甘南牦牛肉的苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸+酪氨酸、赖氨酸、色氨酸含量分别超过理想蛋白质中相应氨基酸的6.8%、1.8%、17.5%、15.9%、47.3%、39.6%、4.0%,蛋氨酸+胱氨酸含量达到理想蛋白质的80%。

绒山羊绒毛生长调控机理研究进展

绒山羊绒毛生长呈明显的季节性周期变化 ,光照时间起了重要的调节作用。日照时间由长变短时绒毛开始生长 ,日照时间由短变长时逐渐停止生长。这种周期变化的启动时间品种间存在较大差异 ,但停止生长的时间几乎是同步的。这当中褪黑激素、催乳素、类胰岛素生长因子 -Ⅰ等对调节毛囊活性存在着直接或间接的影响 ,而日粮的营养水平对绒毛周期性生长没有明显的调节作用。关于绒毛周期生长的遗传调控机理有待深入研究

不同饲喂方案对西农萨能山羊羔羊生长发育的影响

为研究不同饲喂方案对羔羊生长性能的影响,选择出生日期相差5 d以内、体重相近、同质性较好的健康西农萨能山羊羔羊进行试验(公羊40只,母羊34只),随机分为高鲜奶低精料组(A、B组)和低鲜奶高精料组(C、D组),A、C组为母羔,B、D组为公羔。试验期90 d,记录羔羊生长发育指标。结果表明:B组公羔具有最大体重、日增重、体斜长、管围、胸深;A组母羔始终具有同性别内最大体重、日增重、体高、管围、胸深、尻长(P>0.05);高鲜奶组羔羊腹泻率较低,生长发育良好;性别因素对羔羊的生长有一定影响。经综合评定,高鲜奶低精料的饲喂方案更有利于西农萨能山羊羔羊的生长发育。

miRNA的研究进展及其展望

近年来,miRNA已成为生命科学领域的研究热点。文章综述了miRNA在真核和原核生物中的功能,以及miRNA的分子克隆、生物信息学等预测和鉴定方法,并阐述了miRNA研究中的问题及应用前景。

功能基因筛选方法的研究进展

功能基因的筛选研究可为深入了解表型性状的发生和发展过程以及作用机制奠定基础,因而正在成为研究家畜表型性状的重要途径。该领域的迅速发展主要依赖于生物技术的不断提高和发展。文章对功能基因筛选研究策略及其主要技术方法,如候选基因法、全基因组关联分析、二代测序技术、基因编辑技术等的研究进展及应用进行了综述,旨在为相关领域的研究提供参考。

多克隆抗体制备方法的研究进展

<正>抗体作为一种研究工具,在目前的科研以及医学工作中起到举足轻重的作用,因此对抗体制备的要求水平越来越高。近年来,针对抗体制备过程中抗体的分类、抗原制备、免疫动物及免疫方法选择的研究越来越多,本文旨在对以上几个方面的科研进展进行综述。1抗体的分类抗体分为天然抗体、单克隆抗体、多克隆抗体及基因工程抗体4类。1975年英国剑桥大学米尔修塔博士把淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合产生杂交瘤细胞,杂交瘤细胞克服淋巴